【国产策略】系列回顾第2期：镌刻价值·品质赋能—ELISA试剂盒

前情提要

为更好地赋能生物医药行业供应链的柔韧性，泉心泉意供应链之光直播间将陆续举办系列线上直播活动，内容涵盖：数字化供应链、采购供应商管理、国产替代策略等，并结合丰富的实操经验与真实案例，为医药同仁提供相关行研思考与建议。

本期直播继续聚焦国产替代领域，由武汉华美生物事业部总经理叶倩女士、酶免事业部技术总监杜巧荣女士、泉心泉意自有品牌技术支持王伟龙，围绕“泉品x华美生物”双品牌战略，并结合ELISA试剂盒特性及应用领域，集成“产品+平台”之力，践行双品牌合作理念。

直播内容提炼：

* 以下内容基于直播嘉宾演讲，完整版以直播回放为准，提炼内容仅供业内交流。

一、10分钟了解ELISA试剂盒

ELISA试剂盒全称为酶联免疫吸附试剂盒，是一种应用广泛的免疫检测方法。其基本原理是利用抗原和抗体之间的特异性结合，再通过酶-底物反应产生可见的信号，从而定性或定量地检测抗原或抗体的存在。

主要类型有四种：直接ELISA、间接ELISA、夹心ELISA和竞争ELISA，它们各有特点，可针对不同目标物进行检测。华美生物的ELISA试剂盒主要为夹心法、间接法和竞争法。

ELISA试剂盒具有广泛的应用领域，包括基础生物研究、临床诊断、药物研发等。在药物研发领域的具体应用场景如下：

1、中间体半成品检测：细胞培养、中间体、目的基因表达、抗生素、残留等的检测，多对细胞培养上清的检测；

2、动物试验：开展药代动力学分析、安全性药理等研究，至少选择3种以上动物模型（小鼠大鼠狗等），对特定目的蛋白及关联蛋白进行定量检测，多选择血液及排泄物等；

3、细胞疗法药物的开发质控阶段：工艺残留物的检测，如细胞因子的检测；

4、细胞功能评价：针对免疫调节类药物、细胞疗法药物生产过程中，评估T细胞激活因子，进而评估T细胞激活程度；

5、细胞治疗的临床阶段对药效学评价：对靶蛋白及细胞因子与受试药物临床安全性检测；

6、细胞因子释放综合征（CRS）：监测细胞因子变化，评估药物的免疫毒性和免疫原性，反映机体免疫状态，筛选研发方向；

7、生物疫苗：质控生产阶段，蛋白残留的检测。

二、泉品&华美双品牌——打造国产ELISA试剂盒优势

ELISA试剂盒优势可归纳为以下几点：

1、高灵敏度：ELISA试剂盒具有很高的检测灵敏度，可以检测到极低浓度的目标物质。

2、高特异性：由于抗原和抗体之间的特异性结合，ELISA试剂盒可以准确区分目标物质与非目标物质。

3、定量准确：ELISA试剂盒可以通过标准曲线进行定量分析，准确测定目标物质的浓度。

4、操作简便：ELISA试剂盒的操作步骤较为简单，易于标准化，适用于高通量筛选。

5、成本效益：相较于其他检测方法，ELISA试剂盒具有较高的性价比。

泉品直播

而泉品与华美生物共同打造的双品牌ELISA试剂盒最大的特点就是品质稳定。

双品牌ELISA试剂盒说明书

1、微孔板：针对微孔板，我们所选用的微孔板都是具有高吸附、高亲和力、可拆卸的微孔板，基于指标特性，我们选择的都是适合某一指标的最佳微孔板属性。目前我们所提供的微孔板并非空白板条，而是包被相应抗体，整个包被环节依据各个指标特性，筛选合适工艺，抽真空后做稳定性分析，分析表明合适的存放条件，我们包被的微孔板可长期、稳定保存，效期长。

2、抗体对：试剂盒提供的是已经预包被在微孔板的抗体和biotin-antibody，组成高特异性的抗体对，从源头保证试剂盒检测的特异性，保证检测结果的准确性。抗体对质量是决定一个试剂盒性能最关键的因素之一。

为了优选一对好的抗体对，首先需要有高质量的抗原，我们依托华美生物的五大重组蛋白表达平台（大肠杆菌，哺乳，昆虫，酵母，大肠无细胞）和一万余种重组蛋白表达经验，生产重组蛋白作为免疫原，这种免疫原构象和活性更接近天然蛋白，以它做免疫原筛选出的抗体将会有可能对天然待测样本具有更好的特异性和亲和力；

其次华美的杂交瘤单克隆抗体筛选平台和兔多克隆抗体免疫平台技术成熟，自有动物房，平台稳定，项目经验丰富，可以稳定的持续的免疫筛选得到大量候选抗体分子；

同时华美拥有全面的抗体验证技术平台：ELISA、WB、IP、ChIP、FC、Co-IP、IF、IHC等，因此获得大量候选抗体分子后，会在这平台上交叉分析，最终获得高特异性、高效价、高亲和力的抗体。最后分析抗体识别表位并通过实验筛选出最佳性能抗体对。

3、标准品：我们提供的是冻干粉形式标准品，内含保护性成分，其稳定性更好。生产环节采用Bradford及已知浓度蛋白或质控定标蛋白浓度，将其配制成同一浓度后再冻干。采用热破坏置于37度，结合药典法则，冻干粉稳定性理论不少于6个月。

4、Biotin-antibody(100*)及Biotin-antibody diluent：biotin-antibody是标记了生物素的抗体，与包被抗体组成高特异性抗体对。采用生物素标记提高试剂盒检测灵敏度。

5、HRP-avidin(100*)及HRP-avidin diluent：我们提供的是高浓缩HRP-avidin溶液，做过相应热破坏实验置于60度，7天，结合相关指导法则，2-8度可稳定存放，同时与biotin-antibody 组成ABC放大系统，提高试剂盒灵敏度。使用时配成相应的工作液。

6、Sample diluent：样本稀释液，一方面用于重悬标准品，其内含保护性物质，提高试剂盒稳定性；一方面可作为试剂盒0孔，校验整个检测体系。结合结合试剂盒线性参数，其符合样本的免疫学特性，可用于样本稀释。

7、Wash buffer(25*)(洗液)：用于洗去非特异性结合，保证检测结果的特异性和准确性。

8、TMB substrate(TMB显色液)：即3,3’,5,5’-四甲基联苯胺，是一种稳定溶液，与过氧化物酶作用产生清晰的蓝色产物，易于观察。在试剂盒作为显色液起到显色作用，其灵敏度高，稳定性好，显色终止后读数稳定。

9、Stop solution（终止液）：采用硫酸作为终止液，一方面终止液破坏了HRP酶的活性，使酶的催化功能丧失，中止反应，使得读数相对稳定；一方面使pH降低，显色底物的特征吸收波长发生变化。在450nm波长具备吸收波峰。

对于工业级在ELISA试剂盒研发的过程中，采取八大质控标准，多个严控的步骤对各个组分进行重重优化，以保证试剂盒的卓越品质，保证提供给客户的产品具有线性、特异性、稳定性和灵敏度等的高标准。八大质控标准详解如下：

八大质控标准，即线性范围、线性、最低检测限、精确度、特异性、回收率、稳定性和天然样本验证。

1、线性范围：通过线性范围来计算出实际的检测样本值，定量试剂盒标准曲线的相关系数R大于0.99。双品牌ELISA试剂盒的人脂联素(ADP)ELISA Kit的标准曲线，R达到了4个9以上

2、线性：样本经梯度稀释后检测分析即为线性分析。线性是试剂盒准确度和特异性的判定标准。为了评估测定的线性，在各种基质中加入高浓度分析物的样品，并用样品稀释剂稀释以产生具有在测定的动态范围内的值的样品。对每种经验证样品类型进行稀释线性测试，如果结果是每种稀释预期浓度的80%-120%，则视为良好。线性对于检测动态范围内分析物浓度的精确测量非常重要。

3、最低检测限：最低检测限是灵敏度的测试指标。由使用的抗体效价等决定的，在研发过程中，一般会优化保证高灵敏度、低背景的检测结果从而大大提高试剂盒的灵敏度。检测限越低，灵敏度越高。

4、精确度：CV（%）或变异系数代表了测定的一致性，即同一样本重复测定的符合程度。一般是选取同一批次或者不同批次的试剂盒对不同浓度的样本进行定量检测，需要尽量降低批次差异带来的系统误差，保证相同样本结果的重复性。ELISA试剂盒一般考虑两种类型的精度：批内精确度和批间精确度。以人脂联素(ADP)ELISA Kit为例，其批内精确度CV％<8％，批间精确度CV％<10％。

5、特异性：特异性是ELISA试剂盒的关键指标。主要受到不同物种间的高同源性蛋白、靶蛋白配体或靶蛋白受体的干扰。CUSABIO选择具有高特异性的原料，以确保ELISA试剂盒的优异特异性，分析交叉反应和干扰，确认只能识别和检测目标分析物。

6、回收率：回收率=靶蛋白的测定浓度/添加的靶蛋白浓度*100%。它反映了样品分析过程中分析物的损失程度，回收率越高，准确度越高。

7、稳定性：稳定性越好，存储时间越长。通常采用加速降解的方法来推断试剂盒的有效期。通常试剂盒在37℃放置一天折合有效期2个月，实际工作中，一般将试剂盒在37℃破坏4-7天后，然后检测上述指标，观察是否在范围内。也可留样至有效期后进行检验，来衡量有效期，对于批量大的指标，可将加速降解和留样检验相结合的方法。

我们将 ELISA试剂盒的主要原料和测定板在37℃下热损伤测试7天，然后与在4℃下储存的原料进行比较。7天后，OD值≤25％，这是合格的。部分试剂能经受住60度高温的热损伤，最大程度的避免了长途运输和保存过程中抗原抗体的失活。

8、天然样本验证：避免使用有外源性污染的样本，避免血样本出现溶血、细菌污染，最好使用较新鲜样本，避免反复冻融。ELISA试剂盒可以检测天然样品，根据靶点性质对天然样本进行选择（血清，血浆、细胞上清等），为客户提供最真实的实验数据参考。

除此以外，双品牌ELISA试剂盒还有很多产品细节：

1、在新批次原料投入使用前，我们都会进行试产及相关质量稳定性测试，测试合格方可投入使用；

2、试剂瓶纯水清洗干燥后使用，最大限度保证试剂存放稳定性；

3、试剂配制均由双人操作完成，一人配制，一人核对用量并做好记录，配制完成，采取双人检测，检测合格方可进行分装；

4、包被板的制备工序较为复杂，产品专人专项负责，同一个产品所涉及到的不同工序操作，最大限度保证由同一个人完成，生产过程中有人员监督复核，保证生产过程标准化操作，减少人为差异化；

5、生产过程质量控制采取双人双检，每个工序质检合格方流转下一个工序，以保证产品质量，定量试剂盒标准曲线的相关系数R大于0.99，变异系数<8％；仅成品组装环节就有3道工序检查，确保产品交付的准确性。

综上所述，双品牌工业级ELISA试剂盒能够实现以下几个方面：

1、筛选性能更优秀的抗体对、微孔板等原料；

2、增加原料的储备，减少原料批次带来的差异化；

3、抽调骨干员工组建独立团队，严格把控生产过程的质控标准；

4、可以根据药企客户定制化的需求，灵活提高备货量，满足客户对同一批次产品的需求。

三、好产品+好平台——如何助力药企客户国产化战略

目前，药企客户除了对产品质量要求非常高，还有以下痛点和需求：

1、成本压力：药企在研发过程中需要投入大量资金，包括试剂和耗材的成本。此外，进口试剂盒价格较高，加大了药企的成本负担。

2、供应稳定性：药企在进行长期研究时，需要确保试剂盒的供应稳定，避免供应中断导致实验进度受阻，刚过去的疫情和国际形势都使进口产品的稳定供应产生了很大的不确定性。

3、繁琐的采购付款流程：药企客户的研发生产任务往往时间紧，任务重，要求高，而与之对应的是企业内部的采购付款流程繁琐冗长，这就造成了科研人员对试剂供应速度的迫切需求，和企业管理中繁琐的采购流程之间存在矛盾。

4、灵活性和定制化：在药物研发的过程中，不同的项目和不同的研究方向可能需要针对不同的指标进行检测，有些指标市面上没有现成的商业化试剂盒，需要根据客户需求定制开发。

5、技术支持：药企客户在使用试剂盒过程中可能遇到技术问题，需要试剂盒供应商提供及时有效的技术支持。

针对以上痛点，泉心泉意与华美的的双品牌合作，将会从以下几个方面解决：

1、确保产品质量：提供符合药企质量要求且稳定的产品，这个是双品牌产品的基础。前面详细介绍了华美生物为打造工业级ELISA试剂盒做出的一些努力，同时泉心泉意平台合作可以让我们作为生产商与客户零距离沟通，搜集客户反馈，不断迭代产品，持续提高质量和性能。

2、降低成本：国产试剂性相较于进口品牌有很强的价格优势，而双品牌产品借助泉心泉意的供应链渠道，更有助于提高ELISA试剂盒的规模效应，近一步降低成本，从而为药企客户提供更具有竞争力的价格。

3、提高供应稳定性：国产试剂没有进出口风险，持续供应能力强，且泉心泉意与华美的双品牌ELISA试剂盒原料供应自产化程度高，近一步降低供应风险，借助泉心泉意专业的供应链管理，确保试剂盒的供应稳定，满足药企客户的长期需求。

4、简化咨询及采购流程：泉心泉意利用其成熟的供应链平台为药企客户提供便捷快速的检索、咨询、下单、物流等服务，大大减少了药企客户的采购ELISA试剂盒的时间和成本。

5、加强技术支持：双品牌合作有利于双方共享技术资源，拉近厂家与客户的举例，共同为药企客户提供更专业、更全面的技术支持，帮助客户解决实验过程中的问题。

6、个性化的定制服务和新产品研发：一方面华美生物具有丰富的试剂盒研发经验，和原料自主供应能力，使得我们可以快速响应并实现药企客户定制化的需求；另一方面双品牌合作信息共享互通的便利性，又能够让我们保持敏锐的市场嗅觉，不断研发新的试剂盒，充分满足不断变化的药物靶点研发需求。

近两年来，因外部投资环境和政策影响，国内制药企业的国产化压力逐渐增大，而国产化可以降低药品成本，提高药品可及性，同时促进国家经济发展，这是大势所趋。

因此，国产试剂品牌的国际化进程正逐年提升，经过十几年全球市场的检验与洗礼，国产产品质量也稳定提高，药企客户也开始重视国产品牌。泉心泉意与华美生物的双品牌ELISA试剂盒正是在这样的大环境下应运而生。

本款试剂盒具有品质稳定、灵活定制、优质服务等多方面的优势，可为药物研发过程中的客户提供更加准确、快速、高效的检测方案。

华美生物和泉心泉意的双品牌合作，不仅是简单的商业合作，更是通过资源共享和优势互补共同为药企客户赋能的过程，这也是双方合作的重要目标之一，希望能够为药企客户的国产化战略提供有力支持，进一步推动国内生物医药产业的发展。

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